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蛋白质相关服务

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详细介绍Detailed Introduction

酵母双杂交方案
一、 酵母双杂交技术原理及应用
酵母转录因子GAL4含有DNA结合结构域(DNA-Binding domain BD)和转录激活结构域(activationdomain AD),前者可识别DNA上的特异序列,并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游, 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用,启动它所调节的基因的转录。DNA结合结构域(BD)和转录激活结构域(AD)可完全独立地发挥作用。将DNA结合结构域和转录激活结构域分别与bait蛋白和prey蛋白融合表达,若prey蛋白与bait蛋白发生相互作用时就可以将BD与AD在空间结构上重新联结为一个整体与报告基因的上游激活序列结合,发挥激活转录的功能,通过报告基因的表达可以验证两个蛋白的相互作用。
 
 
酵母双杂交技术主要用于寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白、寻找具有药物治疗作用的小分子多肽、寻找蛋白相互作用中起关键作用的结构域或活性位点及绘制蛋白质相互作用系统图谱等方面。
 
文库构建策略比较:
    
二、 实验流程
1、客户样品QC,total RNA提取(也可由客户直接提供total RNA)
2、利用磁珠分选进行mRNA分离
3、以mRNA为模板使用Clontech的SMART技术合成cDNA
4、使用磁珠分选进行cDNA分级分离高效去除小片段
5、将分级纯化的cDNA与pGADT7线性化载体进行同源重组
6、重组产物纯化后电转化DH10B感受态并涂布平板
7、cDNA文库质量验证
8、文库质粒提取
9、文库质粒转化酵母Y187(可选)
  
三、 相关实验结果案例展示
1、 total RNA提取结果:
2、 cDNA磁珠纯化去除小片段
3、 大肠杆菌文库随机挑单克隆菌落PCR验证插入片段大小与阳性率
                 
四、 项目周期
35个工作日
 
五、 质量标准
1、原始文库容量大于10^7 CFU
2、平均插入片段大于1200 bp
3、克隆阳性率大于95%
 
六、 酵母文库交付结果
1、大肠杆菌文库甘油菌 1 mL/管 * 50管
2、文库质粒500 μg
3、酵母文库 1 mL/管 * 50管(可选)
4、文库构建相关图片与测序结果
5、文库构建报告
 
七、 材料要求
针对每个文库,客户需提供至少能提取500 μg总RNA的新鲜样本,或者至少500 μg的高质量总RNA。
 
客户下单
项目信息填写:

1.客户按照提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交;
2.提交项目所需要的具体信息,包括:(1)已知的材料与组织信息;(2)尽可能丰富的相关资料、文献。 
3.材料:用于提取total RNA的组织材料或者已提取好的total RNA;
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时90系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看地址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

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